Nivel de evidencia: II-3

RESUMEN

Objetivos: desarrollar un método para aislar células de citotrofoblasto humano y evaluar su capacidad invasora y de diferenciación.

Tipo de estudio: biomédico experimental.

Material y método: se aislaron citotrofoblastos de placentas sanas de embarazos a término por digestión con dispasa y purifi cación en gradiente de densidad. Se evaluó la pureza por inmunorreactividad a la citoqueratina 7 y la invasividad de las células del citotrofoblasto en Matrigel. La actividad enzimática se determinó por medio de zimografía y la hCG secretada se cuantifi có por ELISA. La expresión de integrinas alfa 1 y alfa 5 se evaluó por inmunohistoquímica.

Resultados: se obtuvieron citotrofoblastos con pureza del 97%, que se diferenciaron, de manera espontánea, a un sincitio después de cuatro días; se acompañó de producción creciente de hCG. La invasividad de los citotrofoblastos fue máxima los primeros dos días, cuando su fenotipo fue mononuclear y coincidió con la secreción de pro-MMP-9, y disminuyó con el tiempo de cultivo. La inmunorreactividad a las integrinas alfa 1 y alfa 5 se observó en las células del citotrofoblasto con el fenotipo mononuclear y fue menor en células con fenotipo de sincitio.

Conclusiones: se desarrolló un modelo in vitro que replica eventos del desarrollo temprano de la placenta, que emulan la etapa de invasión y de diferenciación del citotrofoblasto. Este modelo tiene utilidad potencial en el estudio de los mecanismos de daño en la preeclampsia.

Palabras clave: trofoblasto humano, diferenciación.

ABSTRACT

Objectives: To develop a method to isolate cells of human citotrophoblast and to assess its invading and differentiation capacity.

Type of study: Experimental biomedical.

Materials and method: Citotrophoblasts of healthy placentas of full-term pregnancies were isolated by digestion with dispase and purifi cation in a density gradient. The purity by immunoreactivity to citokeratin 7 and the invasiveness of the cells of citotrophoblast in Matrigel were evaluated. The enzymatic activity was determined through zimography and hCG secreted was quantifi ed by means of ELISA. The expression of alpha 1 and alpha 5 integrins was evaluated by immunohistochemistry.

Results: Citotrophoblasts with a purity of 97% were obtained; they differentiated themselves, in a spontaneous way, to a syncytium after four days. There was a growing production of hCG. Maximum invasiveness of citotrophoblasts ocurred the fi rst two days, when their phenotype was mononuclear and coincided with the secretion of pro-MMP-9, and then it diminished according with the culture time. Immunoreactivity to the alpha 1 and alpha 5 integrins was observed in citotrophoblast cells with mononuclear phenotype. This immunoreactivity was lower in cells with phenotype of syncytium.

Conclusions: It was created an in vitro model that replicates events of the early development of the placenta. These events resemble the invasion and differentiation phase of the citotrophoblast. This model has potential utility in the study of the mechanisms of damage in preeclampsia.

Keywords: human trophoblast, differentiation.