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Expresión de microRNAs asociados con corioamnionitis en suero materno


Ginecol Obstet Mex. 2018 marzo;86(3):174-185DOI: https://doi.org/10.24245/gom.v86i3.1809

Alba Miriam García-Rodríguez,1 Cristina Magali Sánchez-González,Mauricio Osorio-Caballero,3 Néstor Fabián Díaz,4 Héctor Flores-Herrera5

1 Departamento de Biología de la Reproducción Humana.

Residente de segundo año de Biología de la Reproducción.

Departamento de salud sexual y reproductiva.

Departamento de Fisiología y Desarrollo Celular.

5 Departamento de Inmunobioquímica.

Instituto Nacional de Perinatología Isidro Espinosa de los Reyes, Ciudad de México.

Resumen

OBJETIVO: Determinar el perfil de expresión de los miRNA-21, -106, -126 y -146 y la cuantificación de IL-1β en el suero de pacientes embarazadas sanas, a término, con y sin trabajo de parto activo y en pacientes con evidencias clínicas de corioamnionitis.

MATERIALES Y MÉTODOS: Estudio analítico, longitudinal y prolectivo efectuado en pacientes que ingresaron para control, seguimiento obstétrico y terminación del embarazo al Instituto Nacional de Perinatología de la Ciudad de México entre febrero de 2015 y agosto de 2016. Variables de estudio: pacientes embarazadas sanas, a término, con y sin trabajo de parto activo y pacientes con evidencias clínicas de corioamnionitis, edad materna y semanas de gestación. A cada paciente se le tomaron cinco mililitros de sangre periférica para centrifugación y recuperación de suero. La obtención del ARN se efectuó a partir de 500 µL de suero, al que se añadió el mismo volumen del reactivo de TRIzol. El cADN se sintetizó a partir de 3 ng de ARN mediante el ensayo de retrotranscripción. La expresión de los miRNAs se efectuó mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con iniciadores específicos. Los resultados se reportan en media ± desviación estándar y el análisis estadístico se llevó a cabo mediante la prueba de Mann-Whitney, con una diferencia significativa de p < 0.05.

RESULTADOS: Se estudiaron 45 pacientes embarazadas que se dividieron en tres grupos: 1) pacientes sanas a término, sin trabajo de parto activo (n = 15); 2) pacientes con trabajo de parto activo (n = 15); y 3) pacientes con evidencias clínicas de corioamnionitis (n = 15). En las embarazadas sanas, con trabajo de parto activo, el perfil de expresión del miR-126 se incrementó 1.23 veces (p ≤ 0.001) en tanto que el miR-21 y miR-146 disminuyeron 2.1 ( p ≤ 0.001) y 0.73 veces (p ≤ 0.001), respectivamente, y la concentración de IL-1β se incrementó 1.8 veces (p = 0.014) en relación con las pacientes sanas sin trabajo de parto. El perfil de expresión de estos miRNAs y de IL-1β cambió en las pacientes con evidencias clínicas de corioamnionitis. El miR-126 y miR-146 se incrementaron 1.31 (p ≤ 0.001) y 1.1 veces (p = 0.05); en tanto que el miR-21 disminuyó 1.4 veces (p ≤ 0.05) y la concentración de la IL-1β se incrementó 2.8 veces (p = 0.002) con respecto a las pacientes sin trabajo de parto activo. El miR-106 no mostró diferencias significativas entre los tres grupos de estudio.

CONCLUSIONES: En su conjunto, los resultados de este ensayo sugieren que el perfil de expresión entre miR-21, miR-126 y miR-146 podría considerarse marcador molecular de corioamnionitis. Para que esto pueda tomarse como patrón de referencia deberán emprenderse más ensayos que corroboren este patrón y evalúen su eficacia.

PALABRAS CLAVE: Corioamnionitis; miRNAs; pacientes embarazadas; embarazo; edad gestacional.

Expression of microRNAs associated with the development of chorioamnionitis in maternal serum.

Ginecol Obstet Mex. 2018 March;86(3):174-185DOI: https://doi.org/10.24245/gom.v86i3.1809

Alba Miriam García-Rodríguez,1 Carolina Magali Sánchez-González,Mauricio Osorio-Caballero,3 Néstor Fabián Díaz,4 Héctor Flores-Herrera5

1 Departamento de Biología de la Reproducción Humana.

Residente de segundo año de Biología de la Reproducción.

Departamento de salud sexual y reproductiva.

Departamento de Fisiología y Desarrollo Celular.

5 Departamento de Inmunobioquímica.

Instituto Nacional de Perinatología Isidro Espinosa de los Reyes, Ciudad de México.

Abstract

OBJECTIVE: To determine the expression profile of miRNA-21, -106, -126 and -146 and to quantify the secretion of IL-1β in the serum of healthy pregnant patients at term with and without active labor and in patients with clinical evidences of chorioamnionitis.

MATERIALS AND METHODS: Analytical, longitudinal, and prolective study carried out in patients admitted for control, obstetric, and pregnancy resolution into the National Institute of Perinatology in Mexico City between February 2015 and August 2016. Study variables: healthy pregnant patients at term with and without active labor and patients with clinical evidence of chorioamnionitis, maternal and gestational age. Five milliliters of peripheral blood were taken from each patient, which was centrifuged, and the serum recovered. RNA was obtained from 500 μL of serum to which the same volume of TRIzol reagent was added. The cDNA was synthesized with 3 ng of RNA by the reverse transcription assay. The expression of the microRNAs was performed by polymerase chain reaction (PCR) with specific primers. The results are presented as mean ± standard deviation and statistical analysis was performed using the Mann-Whitney test with a significant difference of p<0.05.

RESULTS: In healthy pregnant patients with active labor, it was observed that the expression profile of miR-126 increased 1.23-fold (p≤0.001); while the miR-21 and miR-146 decreased 2.1- (pp≤0.001) and 0.73-fold (p≤0.001) respectively and the concentration of IL-1β increased 1.8-fold (p = 0.014) with respect to the healthy patients without labor. The expression profile of these miRNAs and IL-1β change in patients with clinical evidence of chorioamnionitis. The miR-126 and miR-146 increased 1.31- (p≤0.001) and 1.1-fold (p = 0.05); while miR-21 decreased 1.4-fold (p≤0.05) and the concentration of IL-1β increased 2.88-fold (p = 0.002) with respect to patients without active labor. The miR-106 did not show significant differences between the three study groups.

CONCLUSIONS: These results suggest that miRNA-21, -126 and -146 could be considered as molecular markers in the development of chorioamnionitis; however, more tests should be carried out to corroborate this pattern and evaluate its efficiency.

KEYWORDS: Chorioamnionitis; miRNAs; Pregnant patients; Pregnancy; Gestational age.

Correspondencia/correspondence

Héctor Flores Herrera

h.flores@inper.gob.mx

DOI: https://doi.org/10.24245/gom.v86i3.1809




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